硝基呋喃類代謝物最大允許殘留分析技術(shù)——測定方法（一）

時(shí)間：2023-03-25 05:42:14來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

硝基呋喃類代謝物最大允許殘留分析技術(shù)——測定方法（一）

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

7.1.4.2 測定方法

在已經(jīng)發(fā)表有關(guān)NFs殘留檢測方法的文獻(xiàn)中，早期的報(bào)道大多數(shù)是檢測原藥。然而，由于NFs對光敏感，且具有代謝快速的特點(diǎn)，在動物體內(nèi)的半衰期不過數(shù)小時(shí)，在動物組織中通常不太可能檢出原藥殘留。因此，殘留檢測的標(biāo)識物已經(jīng)變?yōu)樗鼈兊拇x產(chǎn)物。目前，國內(nèi)外報(bào)道的NFs代謝物殘留檢測方法主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)、液相色譜法(LC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)等。

(1)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)

采用液相色譜檢測NFs代謝物的報(bào)道很少，這是因?yàn)槌Ｒ?guī)LC測定技術(shù)難以滿足檢測可食性組織中NFs代謝物的靈敏度要求，不過仍然可以用于方法學(xué)研究等。

Arancibia等建立了尿液中呋喃妥因及其代謝物的HPLC-UV檢測方法。該方法使用SFE萃取尿液中呋喃妥因及其代謝物，以LC-18-DB(250mm×4.6mm，5um)為LC分析柱，流動相為乙腈-水(85+15，v/v)，流速為0.2mL/min，檢測波長為310nm。呋喃妥因的保留時(shí)間為13.38min，其代謝物為10.20min；呋喃妥因的線性范圍為10.9～378.0umol/L(R=0.9995)，其代謝物為3.0×10-3～21.0umol/L(R=0.9992)；檢測限分別為12.1μmol/L和0.9umol/L。Chumanee等建立了蝦肉中4種NFs代謝物殘留的HPLC-DAD檢測方法。20g蝦肉樣品在0.2mol/LHCl的酸性條件下，加入20mmol/L的NTA、0.12g NaOAc、1g KCl，37℃避光過夜反應(yīng)。衍生化之后用乙酸乙酯提取，最后用正己烷LLP除脂。NTA衍生化的代謝物在ChromSpher 5 C18柱(250mm×4.6mm，5μm)上分離，乙腈-5mmol/L酸銨(pH7.5)作為流動相，流速為1mL/min，整個(gè)梯度洗脫程序時(shí)間為40min，洗脫順序?yàn)椋篘TAHD<NTSEM<NTAOZ-<NTAMOZ，NTAHD的檢測波長為310nm，其余為308nm。在1ug/kg、1.5μg/kg、2ug/kg三個(gè)濃度水平進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，回收率均高于86%，CV小于14%。AHD、AOZ、SEM、AMOZ的LOQ分別為0.7803μg/kg、0.7973μg/kg、0.6973ug/kg、0.9118μg/kg，LOD均在0.2ug/kg左右。該方法單純應(yīng)用LC技術(shù)，LOQ就能夠達(dá)到1μg/kg以下，為NFs代謝物的檢測提供了更多的選擇。

(2)膠束動電毛細(xì)管色譜法(micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC)

Wickramanayake等首次建立了NFs及其代謝物(NFM)的膠束動電毛細(xì)管色譜測定方法。選用脫氧膽酸鈉(SDC)作為形成膠束的表面活性劑，采取中央組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(CCD)的方法優(yōu)化分離條件，對緩沖液中硼酸鹽與磷酸的濃度比、運(yùn)行電解質(zhì)的pH、電壓等實(shí)驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。表面活性劑濃度對分辨率的影響是非常顯著的。在優(yōu)化條件下(80mmol/LSDC，pH9.0，20mmol/L硼酸鹽+20mmol/L磷酸，16kV)，8對連續(xù)峰的分辨率在1.9～11.8之間。由于代謝物缺乏具備UV活性的發(fā)色團(tuán)，采用2-NBA進(jìn)行衍生化。為了模仿同時(shí)分析樣品中NFs和衍生化NFM的提取程序，含水樣品(用2-NBA預(yù)衍生)用C18 SPE柱富集。SPE柱經(jīng)水洗滌后，用弱洗脫特性的小體積有機(jī)溶劑(正已烷)去除過量的2-NBA，分析物用乙腈洗脫。采用開發(fā)的方法，所有分析物遷移時(shí)間[t(mig)]的重現(xiàn)性都非常好，絕對t(mig)的RSD小于1%，t(mig)比率的RSD小于0.2%，峰面積比率的RSD為4%。所有化合物的LOD(S/N=3)在0.19～2.0μg/mL之間。

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